ПЛР аналіз на папіломавірус (HPV): чому діагностика життєво важлива?

В чому полягає важливість діагностики?

На глобальному рівні HPV 16 і HPV 18 відповідальні за понад 70% випадків раку шийки матки, що є четвертою за поширеністю онкологічною патологією серед жінок у світі. ВПЛ також пов’язують із розвитком раку вульви, вагіни, анального каналу, пеніса, ротоглотки й гортані. При цьому перебіг інфекції у більшості випадків є безсимптомним, імунна система самостійно справляється з вірусом протягом 1–2 років. Однак у частини людей вірус переходить у персистуючу форму, що підвищує ризик онкогенезу.

Таким чином, раннє виявлення вірусу папіломи людини має ключове значення у профілактиці онкології, особливо серед жінок репродуктивного віку.

Кому рекомендовано проходити ПЛР-діагностику ВПЛ?

Сучасні клінічні протоколи рекомендують аналіз ПЛР на ВПЛ у таких випадках:

• жінкам віком від 30 років — у межах скринінгу на рак шийки матки; 
• при наявності аномальних результатів цитології (Пап-тесту); 
• перед плануванням вагітності; 
• партнерам осіб із підтвердженою ВПЛ-інфекцією; 
• при виявленні аногенітальних бородавок або кондилом; 
• пацієнтам із ВІЛ-позитивним статусом або імунодефіцитними станами. 

Для чоловіків доцільність дослідження визначається індивідуально, особливо в разі клінічних проявів або при проходженні парного обстеження.

Чому саме ПЛР?

ПЛР-тест на вірус папіломи людини — це найточніший метод виявлення ДНК ВПЛ навіть у випадках мінімального вірусного навантаження. На відміну від цитології, яка виявляє вже наслідки ураження (морфологічні зміни клітин), ПЛР-тест дозволяє:

• виявити сам факт наявності вірусу;
• визначити конкретні генотипи ВПЛ;
• оцінити вірусне навантаження (кількісна ПЛР);
• контролювати ефективність лікування та динаміку інфекції.

Це робить аналіз ПЛР ВПЛ незамінним у сучасній медичній практиці.

Ситуація в Україні

За даними ВООЗ, вакцинація проти ВПЛ, яка є основною профілактикою, в Україні лише починає набирати оберти. Тим часом, рівень захворюваності на рак шийки матки залишається стабільно високим. У цьому контексті ПЛР-діагностика ВПЛ має стратегічне значення для зниження онкологічної захворюваності серед жінок.

Полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР) — це високочутливий метод молекулярної діагностики, який дозволяє виявити фрагменти ДНК або РНК патогенів, включаючи вірус папіломи людини (ВПЛ), навіть у незначних кількостях. Завдяки цій методиці можна діагностувати інфекцію на самих ранніх етапах — ще до появи будь-яких клінічних проявів. Саме тому ПЛР-аналіз на папіломавірус вважається «золотим стандартом» у сучасній вірусології.

Принцип дії ПЛР

ПЛР — це методика ампліфікації, тобто багаторазового копіювання певного фрагмента ДНК. Якщо у зразку пацієнта присутній вірус, ПЛР тест ВПЛ «помножить» його генетичний матеріал до таких обсягів, які легко зафіксувати приладом (наприклад, в режимі реального часу — Real-Time PCR). В результаті ми отримуємо відповідь: чи є у зразку вірус, і якщо так — якого типу та у якій кількості.

Для діагностики ВПЛ використовуються спеціальні праймери — короткі послідовності нуклеотидів, які розпізнають консервативні ділянки ДНК вірусу. Це дозволяє виявити:

1. як низькоонкогенні типи ВПЛ (наприклад, 6, 11),
2. так і високоонкогенні штами (наприклад, 16, 18, 31, 33, 45 тощо).

Більшість сучасних тест-систем дозволяють одночасно ідентифікувати кілька типів ВПЛ, що особливо важливо при ко-інфекціях.

Якісна та кількісна ПЛР-діагностика

У лабораторній практиці використовують два основні типи ПЛР-тестів на вірус папіломи людини:

1. Якісна ПЛР (qualitative PCR) — показує, чи присутній вірус у зразку, і які саме його генотипи.
2. Кількісна ПЛР (quantitative PCR або qPCR) — дозволяє оцінити вірусне навантаження, тобто концентрацію ДНК ВПЛ у біоматеріалі. Цей параметр особливо важливий для контролю ефективності лікування та моніторингу прогресування або регресії інфекції.

Для більшої точності використовуються референсні значення — наприклад, порогові цикли ампліфікації (Ct values), які вказують на кількість генетичного матеріалу.

Типи ПЛР-аналізів при діагностиці ВПЛ

Сучасні лабораторії застосовують різні модифікації ПЛР, зокрема:

• Real-Time PCR — забезпечує динамічний контроль ампліфікації та кількісну оцінку вірусного навантаження;
• Multiplex PCR — дозволяє виявляти одразу кілька генотипів ВПЛ у одному зразку;
• LBMA (ligation-based multiplex assay) — інноваційний формат, що дозволяє ідентифікувати до 40 генотипів з високою точністю.

Усі ці варіанти підходять для точного аналізу ПЛР на ВПЛ та мають сертифікати CE IVD, що підтверджують їхню діагностичну надійність у країнах ЄС.

Як підготуватися до ПЛР на папіломавірус? 

Для забезпечення достовірності результатів пацієнтам необхідно дотримуватися простих, але важливих правил підготовки:

Жінкам:

• аналіз краще здавати на 5–20 день менструального циклу;
• за 48 годин до обстеження уникати статевих контактів, використання вагінальних супозиторіїв, тампонів, спринцювань;
• не проходити аналіз під час менструації або запальних процесів.
  

Чоловікам:

• бажано утриматися від статевих контактів за 2 дні до обстеження;
• не мочитися за 1,5–2 години до забору мазка.
  

Порушення цих рекомендацій може призвести до хибнонегативних або хибнопозитивних результатів.

Як довго чекати на результати?

У середньому результати ПЛР-аналізу на ВПЛ готові протягом 1–3 робочих днів. Якщо використовується високопродуктивне автоматизоване обладнання, наприклад, системи на базі Real-Time PCR з мультиплексними наборами, — цей термін може скоротитися до 6–8 годин.

Якість результатів ПЛР-діагностики напряму залежить не лише від кваліфікації персоналу, але й від надійності лабораторного обладнання та тест-систем, які використовуються. В умовах клінічної діагностики вірусу папіломи людини (ВПЛ) це особливо критично, адже результати аналізу можуть слугувати підставою для подальших медичних рішень — від спостереження до хірургічного втручання.

Основні вимоги до тест-систем для ПЛР-аналізу ВПЛ

Високоточна діагностика вірусу папіломи людини потребує дотримання кількох базових умов:

1. Висока аналітична чутливість — здатність виявляти навіть мінімальні кількості вірусної ДНК у зразку.
2. Широке покриття генотипів — особливо важливо при скринінгу онкогенних штамів.
3. Висока специфічність — уникнення хибнопозитивних результатів через перехресну реакцію з іншими ДНК.
4. Сумісність з сучасними термоциклерними платформами, включно з Real-Time PCR.
5. Наявність сертифікацій CE IVD / FDA — як підтвердження клінічної валідності та безпеки.

За посиланням ви можете ознайомитись з наборами GeneFinder™ для ПЛР-аналізу на ВПЛ від корейської компанії OSANG Healthcare. Ці реагенти підходять для типування до 40 генотипів ВПЛ та відповідають усім переліченим вимогам. 

Наявність таких інструментів дозволяє не просто виявити вірус, а й точно визначити його тип, оцінити ступінь ризику, прийняти обґрунтоване клінічне рішення.