ПЛР-діагностика

ПЛР-діагностика — це сучасний метод, що використовується для діагностики різних інфекційних і вірусних захворювань. Сорок років тому ця методика зробила революцію в науці і на сьогодні є однією з найточніших і найдостовірніших у генних і молекулярних дослідженнях.

Метод був розроблений в 1983 році Кері Маллесом, американським біохіміком, за що він отримав Нобелівську премію. Аналіз методом ПЛР широко використовувався  для масового тестування населення під час пандемії COVID-19.

В основі методу ПЛР (полімеразна ланцюгова реакція)  лежить ампліфікація. Це процес багаторазового копіювання певних фрагментів ДНК, що відбувається в лабораторних умовах. Дослідження проводять у пробірках (in vitro), використовуючи повторювані цикли температур, спеціальні ампліфікатори та реагенти.

Процес ампліфікації складається з декількох етапів:

1. Підготовка зразка — виділення ДНК з біологічного матеріалу.
2. Денатурація — в результаті нагрівання до високої температури подвійна спіраль ДНК розділяється на два ланцюги.
3. Відпал — до одноланцюгових ділянок ДНК приєднуються спеціальні праймери, які визначають той фрагмент ДНК, який буде скопійований.
4. Елонгація — ДНК-полімераза синтезує нові ланцюжки, копіюючи задану ділянку.

З кожним циклом кількість копій подвоюється. Через 30-40 циклів можна отримати мільйони копій потрібного фрагмента. За рахунок такої високої чутливості аналізи методом ПЛР вважаються найбільш ефективними.

Матеріалом для ПЛР-діагностики є клітини, що містять молекули ДНК. Проби беруть з біологічного матеріалу людини: крові, сечі, шкіри, волосся, мокротиння та інших виділень.

Іноді перед ампліфікацією проводять етап зворотної транскрипції. Такий метод називається ЗТ-ПЛР і його мета — перетворити РНК в ДНК за допомогою спеціальних ферментів. До цього етапу вдаються тоді, коли потрібно досліджувати РНК-вірус (наприклад, вірус грипу, гепатиту C або ВІЛ).

Діагностика ПЛР —  це універсальний метод дослідження, оскільки дозволяє вченим і лікарям виявити будь-які ДНК і РНК, що не під силу іншим тест-системам. Основними перевагами методу є його специфічність і висока чутливість. 

Ще однією відмінною характеристикою методу є швидкість діагностики. Результат не потрібно чекати довго, як при інших методах.

За допомогою ПЛР в організмі людини можна виявити інфекцію навіть у найменшій її кількості, що особливо важливо при прихованих або безсимптомних формах захворювань.  Методика дозволяє ідентифікувати саме збудник захворювання, що допомагає діагностувати хворобу ще в інкубаційному періоді, коли немає явних зовнішніх проявів.

Унікальність методу сприяє його широкому застосуванню в різних сферах:

• криміналістика;
• медицина;
• генна інженерія;
• наука;
• біологія. 

Встановити батьківство, діагностувати рідкісні або спадкові захворювання, провести селекцію – все це можна зробити за допомогою ПЛР. Метод діагностики особливо поширений в медицині, а саме: ПЛР діагностика вірусних інфекцій або урогенітальних буде більш швидкою і точною.

Компанія «Спектролаб» пропонує наступні набори реагентів для ПЛР-діагностики від виробника OSANG Healthcare:

• ПЛР для HLA-типування — використовується для підбору донорів при трансплантації та дослідженні аутоімунних захворювань.
• ПЛР для HPV — дозволяє виявити онкогенні типи вірусу, асоційовані з ризиком розвитку раку шийки матки.
• ПЛР для урогенітальних інфекцій — швидка діагностика інфекцій, що передаються статевим шляхом (хламідіоз, мікоплазмоз, уреаплазмоз та ін.).

Всі набори містять необхідні компоненти (праймери, ферменти, буфери) та інструкції, тому процес діагностики буде зрозумілим, швидким, зручним і результативним.